2× P6 High-Fidelity Premix

2× P6 High-Fidelity Premix

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CAS NO.:
分 子 式:
分 子 量:
产品简介
2×P6 High-Fidelity Premix 是将 PCR 反应用到的超保真 P6 DNA 聚合酶、buffer、dNTP Mixture 以及稳定剂以 2
倍的终浓度进行混合。使用时,只需在制品溶液中加入模板和引物便可进行 PCR反应,大大简化了操作过程,
降低了 PCR操作过程中污染的可能性。P6 High-Fidelity DNA Polymerase 是基于 Pyrococcus furiosus 的高温 DNA
聚合酶,具有耐热型 5´
-3´ 的聚合酶活力以及 3´
-5´的核酸外切酶活力,因此属于高保真 DNA 聚合酶(其保真度
达到普通 Taq 酶的 55 倍)。该酶经过生物工程改造后,其扩增能力、保真度都得到极大提升,并且具有广泛
的模板适应性,扩增速度达到 2-4 kb/min。优化的 Premix 针对 λ DNA 等简单模板的有效扩增长度可达 40 kb,
cDNA 有效扩增长度可达 15 kb,基因组有效扩增长度可达 20 kb。 

 

 

产品组成        
无染料 21805-01 21805-02 21805-03  
         
2×P6 High-Fidelity Premix 1 mL 10× 1 mL 50 mL(21805-2 × 5)  
Loading buffer 1 mL  
     
 

预混液应置于-20 ℃保存,避免反复冻融。

 

 
产品质控
 
1)性能检测 1
 
在 50 μL PCR 反应体系加入 25 μL premix、100 ng Human RP11 13M9-pBACe3.6 质粒,扩增 15 kb 的 DNA
 
目的片段,在 30 个循环扩增后经 1%琼脂糖凝胶检测可在 15 kb 处检测到非常亮且单一的目的条带。
 
2)性能检测 2
 

在 50 μL PCR 反应体系加入 25 μL premix、大肠杆菌菌落,扩增 5 kb 的 DNA 目的片段,在 30 个循环扩增后经 1%琼脂糖凝胶检测可在 5 kb 处检测到较亮的单一目的条带。
 
3)大肠杆菌核酸残留检测:
 
在 20 μL 荧光定量 PCR 反应体系加入 10 μL premix(无染料)和大肠杆菌特异基因扩增引物(如 gapA);在不加入大肠杆菌 DNA 模板的情况下,20 个循环内荧光信号值在基线范围。

常规 PCR 反应体系:
 
1,在冰浴上设置 PCR 反应(供参考)*:
 
模板: < 500 ng
 
2 × P6 High-Fidelity Premix: 25 μL Primer 1/2: 0.2 - 1.0 μM (final conc.)
 
灭菌蒸馏水 Up to 50 μL
 
2,PCR 反应参数(供参考)**:
 
(起始变性): 95 ℃ 5 min
 
(解链): 95 ℃ 30 sec
 
(退火): 55 ℃ 30 sec
 
(延伸): 72 ℃ x min (30-35 循环:2 kb/min)

(最终延伸): 72 ℃ 7 min
 
(临时保存): 16 ℃ 保温

 

* 针对不同类型的模板,所需的模板量会有不同,如基因组和质粒,等等;需要根据实际情况,添加合适的模板量。** 退火温度需根据引物和模板实际的 G+C 含量来作调整。
Version:20190101. 最新、最全使用方法以官网说明书为准!






 
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